2019.03.22 乾熱滅菌及濕熱滅菌之操作
一、實驗目的
如何正確使用乾熱滅菌(oven)、高壓殺菌釜(autoclave)及其適用對象。
二、實驗原理
๐乾熱滅菌:直接加熱以火焰或高熱使細菌、維生物喪失活性或水分而死亡。(適用於乾燥的玻璃器皿)
๐濕熱滅菌:用的是高壓蒸氣滅菌器。利用壓力下飽和蒸氣使細菌之蛋白酵素產生凝固變性，達到滅菌效果。(適用於耐高溫之培養基)
三、實驗藥品&材料
1、生理食鹽水 1公升
2、培養液 1公升 (RO水:agar=100:4)
3、鋁箔 1捲
4、全脂棉花 1包
儀器、器材
5、試管 5支
6、培養皿 6個
7、三角瓶(250mL) 2個
8、量筒 1個
9、有刻度吸量管(10mL) 5支
10、不銹鋼桶 1個
11、不鏽鋼籃 1個
12、乾熱滅菌器(須附記時器)
13、高壓滅菌釜(須附記時器)
四、實驗操作
乾熱滅菌
1、製作試管、三角錐棉花塞。
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| 實驗照片(ㄧ)、製作三角錐棉花塞 |
2、將定量吸管 尖端朝下 輕放入不鏽鋼罐中跟將培養皿要 倒放 不鏽鋼罐後，放入乾熱滅菌器。
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| 實驗照片(二)、培養皿放入不鏽鋼罐 |
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| 實驗照片(三)、定量吸管放入不鏽鋼罐 |
3、設定溫度:170度、2小時。滅菌完需等溫度降至80度以下方可打開門。
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| 實驗照片(四)、乾熱滅菌器操作 |
濕熱滅菌
1、首先，我們配置培養基(考試時試場會準備好)。作業時，每個人會拿到6個培養皿，每個培養皿要有15g的培養液。方便計算直接配置100g的培養液。細菌培養液配置比例:1000ml(RO水):40g(agar) 。所以100ml的RO水需要4g的agar，因為要三重覆，所以需要秤12g的agar。
其他相關配置培養基資訊:班導 阿源小站 Preparation of TSB, TSA, MRS, and PDA --製備 TSB, TSA, MRS, PDA 培養基
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| 實驗照片(四)、秤量12g的agar。 |
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| 實驗照片(五)、配置完成的培養液。 |
3、高壓滅菌內部加水(需淹過內底部圓盤)，並將培養液、生理食鹽水放入高壓滅菌內部。依序步驟:釜蓋順時鐘鎖緊、打開排氣閥、設定溫度/時間 ( 121度、15分鐘 )。
4、加熱一段時間，排氣閥開始滴水排氣(差不多100度時)，約等3分鐘後將排氣閥關閉。
5、高壓殺菌斧持續加熱至121度，而壓力上升至1.05-1.06kg/cm²(或15lb/in²)時定時器開始計時。
6、時間到，綠燈亮起，表示殺菌完全。
7、將電源關閉壓力下降至1kg/cm²以下，慢慢打開排氣閥(半圈半圈轉，因為避免釜內突然快速減壓，而水氣沸騰衝出)。壓力降至零後，開釜拿出滅菌物。
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